轉染級線性聚乙烯亞胺（MW25000）是一種基于聚乙烯亞胺的瞬時轉染試劑產品，具有較高的轉染效果。聚乙烯亞胺是一種具有高陽離子電荷的有機大分子聚合物，容易結合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復合物。該復合物與細胞表面陰離子結合，通過內吞作用進入細胞。該轉染試劑細胞毒性低，適用于多種細胞系，已廣泛應用于重組蛋白、AAV等的生產。

1. 試劑配置

所需材料：

去離子水或以上生物級水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。

儲存液配置：

⑴ 將1 g轉染級線性聚乙烯亞胺25,000溶解于900 mL去離子水中，邊攪拌（可加熱至60-80℃）邊滴加12 M鹽酸，調整至pH＜2.0，攪拌3小時以上至溶解；

⑵ 用10 M氫氧化鈉調整pH至6.9~7.1；

⑶ 將溶液轉入量筒（或量杯）內，加水定容至1 L；

⑷ 用一次性0.2 µm過濾器真空過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液；

⑸ 可根據需要分裝儲存液，儲存在-20℃可保存1年；儲存液復融后不可重新凍存。

2. 轉染操作流程

接種細胞：為了提高轉染效率，建議在轉染前一天接種細胞，以轉染時細胞密度在70~80%為宜；

準備DNA-轉染試劑復合物：

⑴ 將DNA、轉染試劑和稀釋劑先回復至室溫；

⑵ 用適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA；

⑶ 按照一定比例（每1 μg DNA需用1-5 μL轉染試劑，建議自行摸索配比），將稀釋后的轉染試劑滴加至裝有DNA溶液的試管（勿顛倒添加順序），一邊輕輕渦旋，充分混勻，室溫靜置10~25分鐘孵育。

轉染細胞：

⑴ 在無血清條件下轉染時，去除細胞培養基，替換成無血清培養基；

⑵ 細胞中加入適量DNA-轉染試劑復合物，輕輕混勻，轉染6-8小時后，更換新鮮預熱的培養基；

⑶ 在37℃、5% CO₂培養箱中培養，轉染后24小時即可檢測到轉入基因的表達（可自行確定適合的檢測時間）。

運輸及儲存條件

運輸條件：室溫運輸

保存條件：粉末在室溫或4℃保存，有效期2年。

注意事項

1. 對大多數細胞，每1 μg DNA使用3 μL轉染試劑能獲得較高轉染效率，也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL轉染試劑進行優化。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 本產品僅作科研用途。